Düşük bağlayıcı pipet ipuçlarının kullanımında yaygın yanlış anlamalar nasıl önlenir?

Düşük bağlayıcı pipet uçları hidrofobik iç yüzey tasarımları nedeniyle numune kalıntılarını önemli ölçüde azaltabilir ve özellikle pahalı reaktifleri, viskoz sıvıları veya eser örnekleri (proteinler ve nükleik asitler gibi) işlemek için uygundur. Bununla birlikte, düzgün çalışmazlarsa, deneyin doğruluğunu ve tekrarlanabilirliğini hala etkileyebilirler. Aşağıda, laboratuvar çalışma özellikleri ile birlikte kullanılan yaygın hataların ve çözümlerin bir analizidir:

Yanlış Anlama 1: ucun ön durulmasını göz ardı etmek

Yanlış çalışma: Örneği doğrudan aspire edin ve ön durulama adımını atlayın.

Etki: Düşük bağlayıcı pipet uçları, serum, protein veya organik çözücü gibi numuneler için kalıntıları azaltabilse de, iç duvarları yüzey gerilimi nedeniyle bir mikro-sıvı film oluşturabilir ve bu da düşük bir başlangıç ​​pipetleme hacmine neden olabilir.

Doğru Yaklaşım: Resmi pipetlemeden önce, ucun iç duvarında (yüksek sıcaklık/düşük sıcaklık sıvıları hariç) kararlı bir sıvı film katmanı oluşturmak için aspirasyon-deşarjı 2 ila 3 kez tekrarlayın.

Yanlış Anlama 2: Aspirasyon hızı çok hızlı veya açı eğimli

Yanlış çalışma: Sıvıyı hızlı bir şekilde aspirasyon yapın veya pipet 20 ° 'den fazla eğilir.
Darbe:

Pipet çok hızlı: kabarcıklar veya sırt emme (sıvı pipete koşar ve pistonu kirletir);
Pipet eğik: Sıvı yüzey basıncını değiştirir, bu da yanlış pipetleme hacmi ve artan artık hacim ile sonuçlanır. Doğru Yaklaşım:
Pipet yavaşça ve yavaşça serbest bırakın: sabit bir hızda çalışın ve piston salım hızını kontrol edin;
Dikey tutun: Pipet ucu sıvı yüzeye daldırıldığında eğim açısını ≤20 ° tutun.
Yanlış Anlama 3: Viskoz sıvıların operasyonel farklılıklarını göz ardı etmek
Yanlış çalışma: Yüksek viskoziteli numuneler (gliserol ve hücre süspansiyonları gibi) için sıradan sıvılarla aynı pipetleme hızını kullanın.
Etki: Viskoz sıvılar pipet ucunun iç duvarında yavaşça akar ve hızlı deşarj, düşük adsorpsiyon tasarımının avantajlarını dengeleyerek artık hacimde önemli bir artışa neden olacaktır.
Doğru Yaklaşım:

Daldırma süresini uzatın: Çıkarmadan önce aspire ettikten sonra sıvı yüzeyde 1 saniye kalın ve taburcu ederken sıvıyı üflemek için ikinci vitese basmadan önce 1 saniye duraklatın;
Geniş ağızlı bir pipet ucu seçin: Makromoleküller veya hücre numuneleri için, kesme kuvvetini azaltmak için geniş ağızlı düşük adsorpsiyon pipet ucu (standart diyaframdan% 70 daha büyük) kullanın.
Yanlış Anlama 4: İpucu takarken sert vurma
Yanlış Çalışma: Uçu "sıkmak" için tekrar tekrar pipet sapına çarpmak.
Etki: Uzun vadeli etki, pipet sızdırmazlık bileşenlerini giyecek, hava geçirmezliği yok edecek ve sızıntı veya hacim hatasına neden olacaktır.
Doğru Yöntem: Pipeti dikey olarak ucuna yerleştirin, hafifçe basın ve sola ve sağa oturmak için hafifçe döndürün.

Yanlış Anlama 5: Yanlış Depolama veya Yeniden Kullanım
Yanlış Çalışma:

Uçta artık sıvı olduğunda pipeti düz koyun;
Maliyetlerden tasarruf etmek için tek kullanımlık düşük adsorpsiyon ipuçlarını yeniden kullanın. Darbe:
Piston yayını aşındırması için düz neden sıvı akışına neden olmak;
Yeniden kullanım çapraz kontaminasyon veya yapısal deformasyon nedeniyle doğruluğu etkileyebilir. Doğru yöntem:
Pipetlemeden hemen sonra ucu atın ve pipeti dikey olarak asın;
Özellikle PCR ve izotoplar gibi hassas deneyler söz konusu olduğunda, yeniden kullanım kesinlikle yasaktır.
Profesyonel Tavsiye: Düşük tutuklu ipuçlarının avantajlarını en üst düzeye çıkarın
Sıvıların özelliklerini eşleştirin:
Uçucu Sıvılar (Kloroform gibi): Sıradan düşük tutma uçlarını kullanmaktan kaçının ve solvent güvenli uçları veya uçucu reaktifler için tasarlanmış harici piston pipetleri kullanmak.
Kalibrasyon Doğrulaması:
Gerçek hacmin standardı karşılayıp karşılamadığını doğrulamak için analitik bir denge ile pipetlenmiş saf suyun ağırlığını düzenli olarak tartın (1ml = 20 ℃ 'de 1 ml = 0.9982g).
Anahtar Noktalar Özeti: Düşük tutuklu ipuçları, örnek kaybını azaltarak doğruluğu artırır, ancak operasyonun ayrıntıları göz ardı edilirse, yine de verimsiz olabilir. Standart kurulum, hız kontrolü, örnek özelliklere uyum ve katı bir kerelik kullanım, yüksek tekrarlanabilirlik deneylerinin elde edilmesinin temelini oluşturur.